NanoTandems per saggi diagnostici

info Nei NanoTandem AcZon, la matrice di silice può ospitare fino a sei diverse specie di molecole fluorescenti che interagiscono tra di loro come una catena di donatori e accettori sfruttando il fenomeno del FRET,

I NanoTandem AcZon sono stati progettati come soluzione ai ben noti problemi dei tandem dyes convenzionali in citometria a flusso, come estensivamente descritto da Jensen e i suoi colleghi nella pubblicazione del 2020 ma anche, in precedenza, da Morawski nel 2019, Johansson nel 2014 e Le Roy nel lontano 2009.

Al pari di quanto accade nei tandem dyes convenzionali, i NanoTandem AcZon funzionano sulla base del trasfermento di energia per risonanza di Förster (FRET). Nel core di silice dei NanoTandems, possono essere legati covalentemente fino a sei diverse molecole fluorescenti che agiscono tra di loro come accettore e donatore. Il raggio laser colpisce il primo fluorocromo (donatore) della catena, che emette energia per eccitare il seguente (accettore) come rappresentato nella figura sottostante. La presenza dello scudo protettivo previene da degradazione delle molecole fluorescenti, garantendo un segnale maggiore ma, soprattutto, prolunga nel tempo la stabilità del reagente evitando ripetuti, e spiacevoli, risettaggi strumentali e spreco di reagente. 

info Sangue intero da donatori sani, è stato marcato con Mouse anti Human CD4 (EDU-2; IgG2a) coniugato con diversi fluorocromi. Alexa Fluor® è un trademark di Life Technologies Corp.

L'inclusione di diversi tipi di molecole fluorescenti in diverse proporzioni ottimizzate, garantisce un'impronta di fluorescenza unica che offre importanti vantaggi in citometria spettrale dove l'intero spettro è il parametro chiave per la discriminazione antigenica. 

• Robinson JP. Flow cytometry: past and future. Biotechniques. 2022 Apr;72(4):159-169.
• Jensen IJ, McGonagill PW, Lefebvre MN, Griffith TS, Harty JT, Badovinac VP. Worry and FRET: ROS Production Leads to Fluorochrome Tandem Degradation and impairs Interpretation of Flow Cytometric Results. Immunity. 2020 Mar 17;52(3):419-421.
• Morawski PA, Motley SJ, Campbell DJ. Rapid Light-Dependent Degradation of Fluorescent Dyes in Formulated Serum-Free Media. Immunohorizons. 2019 Dec 16;3(12):585-592.
• Johansson U, Macey M. Tandem dyes: Stability in cocktails and compensation considerations. Cytometry B Clin Cytom. 2014 May;86(3):164-74.
• Le Roy C, Varin-Blank N, Ajchenbaum-Cymbalista F, Letestu R. Flow cytometry APC-tandem dyes are degraded through a cell-dependent mechanism. Cytometry A. 2009 Oct;75(10):882-90.